POLECAMY
Koszyk
Biofizyka
Wybrane zagadnienia wraz z ćwiczeniami
Redakcja:
Wydawca:
Format:
ibuk
Jedyny, uniwersalny podręcznik obejmujący podstawy biofizyki, a także metody stosowane w badaniach układów biologicznych.
Książka zawiera podstawowy kurs biofizyki oraz omówienie i zastosowania:
- spektrofluorymetrii,
- spektrofotometrii i innych metod spektroskopowych,
- cytometrii przepływowej,
- promieniowania laserowego,
- chromatografii,
- spektrometrii elektronowego rezonansu paramagnetycznego,
- metod fluorescencyjnych w badaniach apoptozy.
| Rok wydania | 2012 |
|---|---|
| Liczba stron | 553 |
| Kategoria | Inne |
| Wydawca | Wydawnictwo Naukowe PWN |
| ISBN-13 | 978-83-01-14461-6 |
| Numer wydania | 1 |
| Język publikacji | polski |
| Informacja o sprzedawcy | ePWN sp. z o.o. |
Ciekawe propozycje
Spis treści
| 1. Statystyczna ocena wyników pomiarów | 15 |
| 1.1. Wprowadzenie. Pojęcie pomiaru (B. Rychlik) | 15 |
| 1.1.1. Jednostki miar układu SI | 15 |
| 1.1.1.1. Jednostki podstawowe | 16 |
| 1.1.1.2. Jednostki pochodne | 16 |
| 1.1.2. Dziesiętne wielokrotności i podwielokrotności jednostek miar | 18 |
| 1.1.3. Jednostki miar spoza układu SI | 18 |
| 1.2. Analiza błędów pomiarowych | 20 |
| 1.2.1. Rodzaje i źródła błędów pomiarowych | 20 |
| 1.2.2. Określanie niepewności pomiarowej | 20 |
| 1.2.2.1. Określanie niepewności pomiarowej wielkości mierzonej bezpośrednio | 21 |
| 1.2.2.2. Określanie niepewności pomiarowej przy pomiarach pośrednich | 21 |
| 1.3. Współzależność cech; korelacja i regresja liniowa (B. Rychlik) | 22 |
| 1.4. Zmienna losowa, rozkłady zmiennej losowej (B. Rychlik) | 24 |
| 1.5. Kryteria oceny metod analitycznych (M. Puchała) | 25 |
| 1.6. Ćwiczenia. Rozkłady zmiennych losowych: Gaussa i Poissona (B. Rychlik) | 28 |
| Literatura | 29 |
| 2. Ćwiczenia wprowadzające do biofizyki | 30 |
| 2.1. Gęstość ciał stałych i cieczy (M. Soszyński) | 30 |
| 2.1.1. Wyznaczanie gęstości ciał stałych i cieczy za pomocą wagi hydrostatycznej | 32 |
| 2.1.2. Wyznaczanie gęstości względnej cieczy za pomocą piknometru | 34 |
| 2.1.3. Wyznaczanie gęstości cieczy za pomocą areometru | 35 |
| 2.1.4. Wyznaczanie gęstości płynów biologicznych metodą pomiaru prędkości opadania kropli | 35 |
| 2.2. Elementy akustyki i ruch falowy (M. Soszyński) | 37 |
| 2.2.1. Wyznaczanie prędkości rozchodzenia się dźwięku w ciele stałym za pomocą rury Kundta | 41 |
| 2.2.2. Wyznaczanie częstości drgań widełek stroikowych metodą Quinckego | 41 |
| 2.3. Wilgotność względna i bezwzględna powietrza (M. Soszyński) | 42 |
| 2.3.1. Zasada działania psychrometru | 43 |
| 2.4. Kalorymetria (M. Soszyński) | 45 |
| 2.4.1. Wyznaczanie ciepła topnienia lodu | 46 |
| 2.4.2. Wyznaczanie współczynnika rozszerzalności objętościowej cieczy za pomocą piknometru | 48 |
| 2.4.3. Wyznaczanie ilości ciepła wydzielanego z organizmu człowieka przy oddychaniu | 49 |
| 2.5. Zjawisko termoelektryczne. Wyznaczanie temperatury za pomocą termopary (M. Soszyński) | 50 |
| 2.6. Pomiar oporu elektrycznego i siły elektromotorycznej (M. Soszyński) | 53 |
| 2.6.1. Pomiar oporu elektrycznego przewodnika w układzie mostka Wheatstone'a | 53 |
| 2.6.2. Pomiar siły elektromotorycznej (SEM) ogniwa metodą kompensacji | 55 |
| 2.7. Oscyloskop katodowy (M. Soszyński) | 57 |
| 2.8. Warstwa monomolekularna (M. Koter-Michalak) | 60 |
| Literatura | 62 |
| 3. Termodynamika | 63 |
| 3.1. Podstawowe pojęcia termodynamiki klasycznej (M. Bryszewska) | 63 |
| 3.1.1. Pojęcie układu, parametry układu, stan układu | 63 |
| 3.1.2. Pierwsza zasada termodynamiki; funkcje stanu | 64 |
| 3.1.3. Druga zasada termodynamiki; procesy odwracalne i nieodwracalne.Entropia, entalpia swobodna | 65 |
| 3.1.4. Entalpia swobodna reakcji chemicznych | 67 |
| 3.1.5. Zadania rachunkowe z termodynamiki (M. Przybylska) | 70 |
| 3.2. Ćwiczenia | 79 |
| 3.2.1. Entalpia swobodna reakcji dysocjacji p-nitrofenolu (M. Koter-Michalak) | 79 |
| 3.2.2. Entalpia swobodna oddziaływania ligandu z błoną komórkową. Wykres Scatcharda (A. Marczak) | 80 |
| 3.2.3. Wyznaczanie E0' układu oksyhemoglobina/methemoglobina (A. Marczak) | 83 |
| 3.2.4. Wyznaczanie współczynnika odbicia (A. Marczak) | 86 |
| 3.2.5. Wyznaczanie mechanicznego współczynnika filtracji (M. Koter-Michalak) | 88 |
| Literatura | 90 |
| 4. Spektrofotometria | 91 |
| 4.1. Podstawy spektroskopii UV-Vis (K. Gwoździński, A. Koceva-Chyła) | 91 |
| 4.1.1. Charakterystyka promieniowania elektromagnetycznego i jego oddziaływania z materią | 91 |
| 4.1.2. Wiązania chemiczne w cząsteczkach | 93 |
| 4.1.3. Przejęcia elektronowe w cząsteczkach | 96 |
| 4.1.4. Wpływ polarności rozpuszczalnika na widma UV | 103 |
| 4.1.5. Prawa absorpcji promieniowania elektromagnetycznego i ich zastosowanie | 105 |
| 4.1.6. Odchylenia od prawa Bouguera-Lamberta-Beera | 109 |
| 4.1.7. Zastosowanie spektrofotometrii UV-Vis | 112 |
| 4.2. Budowa i ogólna zasada działania spektrofotometrów UV-Vis(K. Gwoździński, A. Koceva-Chyła) | 114 |
| 4.2.1. Podział spektrofotometrów | 118 |
| 4.2.2. Parametry charakteryzujące spektrofotometry | 119 |
| 4.3. Ćwiczenia | 120 |
| 4.3.1. Prawo Bouguera-Lamberta-Beera. Wyznaczanie współczynników absorpcji (M. Puchała, A. Krokosz) | 120 |
| 4.3.2. Spektrofotometryczne oznaczanie stężenia związku w mieszaninie dwuskładnikowej. Prawo addytywności absorpcji (M. Puchała, A. Krokosz) | 121 |
| 4.3.3. Widma absorpcyjne różnych form hemoglobiny. Spektrofotometr dwuwiązkowy w zakresie UV-Vis (M. Puchała, A. Krokosz) | 123 |
| 4.3.4. Kinetyka reakcji utleniania hemoglobiny. Aktywność katalazy (M. Puchała, A. Krokosz) | 128 |
| 4.3.5. Wpływ różnych czynników na widma w zakresie UV-Vis (K. Gwoździński) | 130 |
| Literatura | 131 |
| 5. Zastosowanie znaczników fluorescencyjnych w badaniach błon biologicznych | 132 |
| 5.1. Ogólna charakterystyka znaczników fluorescencyjnych (M. Bryszewska) | 132 |
| 5.1.1. Przykłady najważniejszych znaczników fluorescencyjnych | 133 |
| 5.1.2. Procesy fizyczne zachodzące w cząsteczce znacznika po pochłonięciu przez nią fotonu | 135 |
| 5.1.2.1. Absorpcja i fluorescencja | 135 |
| 5.1.2.2. Polaryzacja fluorescencji | 136 |
| 5.1.2.3. Gaszenie fluorescencji | 139 |
| 5.1.3. Aparatura i pomiar fluorescencji znaczników | 140 |
| 5.2. Badanie fizycznej struktury błon biologicznych za pomocą znaczników fluorescencyjnych (M. Bryszewska) | 141 |
| 5.2.1. Oddziaływanie znaczników z błonami | 141 |
| 5.2.2. Lokalizacja znaczników w błonach | 142 |
| 5.2.3. Badanie ładunku powierzchniowego błon | 143 |
| 5.2.4. Badanie ruchów cząsteczek w błonach | 144 |
| 5.2.4.1. Badanie dyfuzji rotacyjnej w błonach | 144 |
| 5.2.4.2. Badanie dyfuzji lateralnej w błonach | 146 |
| 5.2.5. Badanie oddziaływań białkowo-lipidowych w błonach | 148 |
| 5.2.6. Wyniki wybranych badań zmian błon komórkowych w stanach patologicznych przy użyciu znaczników fluorescencyjnych | 150 |
| 5.3. Ćwiczenia | 151 |
| 5.3.1. Ogólna budowa i zasada działania spektrofluorymetru (M. Puchała) | 151 |
| 5.3.2. Charakterystyka spektralna związków fluoryzujących w zakresie UV-Vis (M. Puchała) | 152 |
| 5.3.3. Fluorymetryczne oznaczanie zawartości tryptofanu w białkach (M. Przybylska, M. Puchała) | 155 |
| 5.3.4. Analiza dyfuzji lateralnej pirenu w błonach komórkowych krwinek czerwonych(M. Przybylska) | 157 |
| 5.3.5. Badanie wpływu wybranych związków chemicznych na mikrolepkość błony komórkowej erytrocytów metodą pomiaru współczynnika anizotropii fluorescencji TMA-DPH (M. Przybylska) | 158 |
| 5.3.6. Oznaczanie potencjału błonowego krwinek czerwonych metodą fluorymetryczną (M. Przybylska) | 161 |
| 5.3.7. Badanie szybkości transportu doksorubicyny przez błony komórkowe erytrocytów (M. Przybylska) | 164 |
| 5.3.8. Wyznaczanie parametru wiązania znacznika fluorescencyjnego 1-anilinonaftaleno-8-sulfonianu z błoną komórkową krwinek czerwonych (M. Przybylska) | 166 |
| 5.3.9. Wyznaczanie szybkości akumulacji daunorubicyny w błonach komórkowych fibroblastów metodą transferu energii (M. Przybylska) | 169 |
| Literatura | 171 |
| 6. Spektrometria elektronowego rezonansu paramagnetycznego (EPR) | 173 |
| 6.1. Podstawy spektroskopii EPR (K. Gwoździński, M. Koter-Michalak) | 174 |
| 6.2. Rodniki nitroksylowe w metodzie znakowania spinowego (K. Gwoździński) | 178 |
| 6.3. Metoda pułapkowania spinowego (K. Gwoździński) | 186 |
| 6.4. Widma znaczników spinowych przyłączonych do lipidów i białek (K. Gwoździński, M. Koter-Michalak) | 188 |
| 6.5. Budowa spektrometrów EPR (K. Gwoździński) | 195 |
| 6.6. Ćwiczenia | 197 |
| 6.6.1. Dobór niektórych parametrów związanych z rejestracją widm EPR (K. Gwoździński) | 197 |
| 6.6.2. Wyznaczanie podstawowych parametrów widma EPR (K. Gwoździński) | 198 |
| 6.6.3. Wpływ polarności oraz lepkości rozpuszczalników na widmo EPR (K. Gwoździński) | 199 |
| 6.6.4. Badanie szybkości redukcji związków znakowanych spinowo w erytrocytach (K. Gwoździński) | 200 |
| 6.6.5. Wyznaczanie energii aktywacji procesu redukcji nitroksydu we wnętrzu erytrocytów (K. Gwoździński) | 201 |
| 6.6.6. Badania zmian konformacyjnych białek błonowych przy użyciu znacznika maleimidowego (K. Gwoździński) | 203 |
| 6.6.7. Denaturacja termiczna znakowanej spinowo albuminy (K. Gwoździński, G. Bartosz) | 204 |
| 6.6.8. Wyznaczanie parametru widmowego Tempo dla sztucznych błon fosfolipidowych (M. Koter-Michalak) | 205 |
| 6.6.9. Badanie wpływu etanolu na stopień uporządkowania lipidów błony erytrocytarnej (M. Koter-Michalak) | 206 |
| 6.6.10. Wyznaczanie mikrolepkości wnętrza erytrocytu (M. Koter-Michalak) | 207 |
| 6.6.11. Badanie wolnych rodników w materiale biologicznym (M. Koter-Michalak) | 208 |
| Literatura | 209 |
| 7. Inne metody spektroskopowe | 210 |
| 7.1. Turbidymetria i nefelometria (A. Koceva-Chyła) | 210 |
| 7.1.1. Podstawy teoretyczne | 210 |
| 7.1.2. Ćwiczenia | 214 |
| 7.1.2.1. Turbidymetryczne oznaczenie stężenia komórek (A. Koceva-Chyła) | 214 |
| 7.1.2.2. Wyznaczanie przebiegu hemolizy krwinek na podstawie pomiaru zmian turbidancji (A. Koceva-Chyła) | 215 |
| 7.2. Polarymetria (A. Koceva-Chyła, M. Puchała) | 216 |
| 7.2.1. Podstawy teoretyczne | 216 |
| 7.2.1.1. Światło niespolaryzowane | 216 |
| 7.2.1.2. Polaryzacja światła, światło spolaryzowane | 217 |
| 7.2.1.3. Sposoby polaryzacji światła | 219 |
| 7.2.1.4. Polaryzatory i analizatory światła | 222 |
| 7.2.1.5. Skręcenie płaszczyzny polaryzacji przez substancje optycznie czynne | 225 |
| 7.2.1.6. Dichroizm kołowy (M. Puchała, A. Krokosz) | 227 |
| 7.2.1.7. Dyspersja skręcalności optycznej i dichroizm kołowy (M. Puchała, A. Krokosz) | 228 |
| 7.2.1.8. Skręcalność właściwa | 229 |
| 7.2.1.9. Oznaczanie kąta skręcenia płaszczyzny polaryzacji | 230 |
| 7.2.1.10. Polarymetry - rodzaje i budowa | 230 |
| 7.2.1.11. Zasada pomiaru kąta skręcenia płaszczyzny polaryzacji w polarymetrze kołowym | 231 |
| 7.2.2. Budowa i zasada działania polarymetru automatycznego POLAMAT A (A. Krokosz) | 233 |
| 7.2.3. Ćwiczenia | 235 |
| 7.2.3.1. Polarymetryczne oznaczenie stężenia i skręcalności właściwej sacharozy (A. Koceva-Chyła) | 235 |
| 7.2.3.2. Aktywność optyczna aminokwasów i białek (M. Puchała, A. Krokosz) | 236 |
| 7.3. Refraktometria (A. Koceva-Chyła) | 237 |
| 7.3.1. Podstawy teoretyczne | 237 |
| 7.3.1.1. Zjawiska odbicia i załamania światła w ośrodkach izotropowych | 237 |
| 7.3.1.2. Zjawisko całkowitego wewnętrznego odbicia, kąt graniczny | 240 |
| 7.3.1.3. Czynniki wpływające na wartość współczynnika załamania światła | 241 |
| 7.3.1.4. Refrakcja molowa, refrakcja właściwa i egzaltacja | 243 |
| 7.3.1.5. Zastosowanie pomiaru kąta granicznego w refraktometrii | 245 |
| 7.3.1.6. Refraktometry - budowa i zasada działania | 245 |
| 7.3.2. Ćwiczenia | 247 |
| 7.3.2.1. Wyznaczenie zależności pomiędzy stężeniem a współczynnikiem załamania światła roztworów alkoholu etylowego i alkoholu metylowego (A. Koceva-Chyła) | 247 |
| 7.3.2.2. Wyznaczenie stężenia białka w osoczu krwi metodą refraktometryczną(A. Koceva-Chyła) | 249 |
| Literatura | 250 |
| 8. Potencjometria i konduktometria | 251 |
| 8.1. Potencjometria (A. Fortuniak) | 251 |
| 8.1.1. Elektrody | 251 |
| 8.1.1.1. Elektroda wodorowa | 252 |
| 8.1.1.2. Elektrody pierwszego rodzaju | 252 |
| 8.1.1.3. Elektrody drugiego rodzaju | 253 |
| 8.1.1.4. Elektrody trzeciego rodzaju | 254 |
| 8.1.1.5. Elektrody redoks | 254 |
| 8.1.1.6. Elektrody tlenkowe | 255 |
| 8.1.1.7. Elektrody jonoselektywne | 255 |
| 8.1.1.7.1. Elektrody membranowe krystaliczne | 256 |
| 8.1.1.7.2. Elektrody membranowe heterogenne | 257 |
| 8.1.1.7.3. Elektrody membranowe z ciekłym wymieniaczem | 257 |
| 8.1.1.7.4. Elektrody enzymatyczne | 257 |
| 8.1.2. Zastosowanie pomiarów potencjometrycznych | 257 |
| 8.1.2.1. Pomiar pH | 257 |
| 8.1.2.2. Miareczkowanie potencjometryczne | 258 |
| 8.1.2.2.1. Miareczkowanie metodą klasyczną | 258 |
| 8.1.2.2.2. Miareczkowanie do punktu zerowego | 259 |
| 8.1.2.2.3. Miareczkowanie metodą różnicową | 259 |
| 8.1.2.2.4. Miareczkowanie z dwumetalicznym układem elektrod | 260 |
| 8.1.3. Zastosowanie pomiarów potencjometrycznych do wyznaczania stałych fizykochemicznych | 260 |
| 8.2. Konduktometria (A. Fortuniak) | 261 |
| 8.2.1. Zastosowanie pomiarów konduktometrycznych | 262 |
| 8.2.1.1. Miareczkowanie konduktometryczne | 262 |
| 8.2.1.2. Miareczkowanie alkacymetryczne | 263 |
| 8.2.1.3. Miareczkowanie strąceniowe | 264 |
| 8.2.2. Konduktometria bezpośrednia | 264 |
| 8.2.3. Zastosowanie pomiarów konduktometrycznych | 265 |
| 8.2.3.1. Wyznaczanie stałej dysocjacji | 265 |
| 8.2.3.2. Wyznaczanie iloczynu rozpuszczalności | 265 |
| 8.3. Ćwiczenia | 266 |
| 8.3.1. Jonowe właściwości aminokwasów pH-metryczne wyznaczanie pK glicyny (A. Marczak) | 266 |
| 8.3.2. Miareczkowanie kwasu ortofosforowego pH-metrycznie i wobec wskaźników pH (A. Marczak) | 269 |
| 8.3.2.1. Miareczkowanie wobec wskaźników | 270 |
| 8.3.2.2. Miareczkowanie pH-metryczne | 271 |
| 8.3.3. Wyznaczanie przewodności elektrycznej erytroplazmy (M. Koter-Michalak) | 271 |
| Literatura | 272 |
| 9. Wiskozymetria | 273 |
| 9.1. Lepkość biopolimerów (K. Gwoździński) | 273 |
| 9.1.1. Lepkość, wiadomości ogólne | 273 |
| 9.1.2. Makrocząsteczka podczas przepływu | 276 |
| 9.1.3. Pomiary lepkości | 280 |
| 9.2. Ćwiczenia | 283 |
| 9.2.1. Wyznaczanie współczynnika lepkości metodą Stokesa (M. Soszyński) | 283 |
| 9.2.2. Pomiar lepkości względnej cieczy przy użyciu wiskozymetru kapilarnego (M. Soszyński) | 284 |
| 9.2.3. Zastosowanie pomiarów lepkości do wyznaczania masy cząsteczkowej polimeru (K. Gwoździński) | 285 |
| Literatura | 287 |
| 10. Wirowanie | 288 |
| 10.1. Wirówki (M. Puchała) | 288 |
| 10.2. Ultrawirówki (K. Gwoździński) | 292 |
| 10.3. Określanie mas cząsteczkowych metodą szybkości sedymentacji (K. Gwoździński) | 294 |
| 10.4. Wyznaczanie mas cząsteczkowych metodą równowagi sedymentacyjnej (K. Gwoździński) | 299 |
| 10.5. Sedymentacja w gradiencie gęstości (K. Gwoździński) | 302 |
| 10.6. Równowaga sedymentacyjna w ustalonym gradiencie (K. Gwoździński) | 306 |
| 10.7. Ćwiczenia | 308 |
| 10.7.1. Wirowanie - ćwiczenie wstępne (A. Krokosz) | 308 |
| 10.7.2. Termiczna denaturacja białka (M. Puchała) | 309 |
| 10.7.3. Rozdział lipoprotein osocza metodą ultrawirowania (K. Gwoździński) | 310 |
| 10.7.4. Rozdział mieszaniny kwasów rybonukleinowych metodą wirowania w gradiencie gęstości sacharozy (K. Gwoździński) | 312 |
| 10.7.5. Oznaczanie pojedynczych pęknięć w DNA metodą ultrawirowania w gradiencie sacharozy alkalicznej (B. Rózga) | 314 |
| 10.7.6. Oznaczanie superhelikalnooci nukleoidu DNA metodą ultrawirowania w gradiencie sacharozy neutralnej (B. Rózga) | 319 |
| Literatura | 323 |
| 11. Elektroforeza | 324 |
| 11.1. Ogólne zasady (G. Zaleśna) | 324 |
| 11.1.1. Próbka | 325 |
| 11.1.2. Bufory | 325 |
| 11.1.3. Elektroendoosmoza | 326 |
| 11.1.4. Zastosowanie metody | 326 |
| 11.2. Ćwiczenia | 327 |
| 11.2.1. Rozdział białek surowicy krwi człowieka na acetylocelulozie (W. Duda, G. Zaleśna) | 327 |
| 11.2.2. Rozdział białek surowicy ludzkiej metodą elektroforezy w żelu poliakryloamidowym (G. Zaleśna) | 328 |
| 11.2.3. Oznaczanie masy cząsteczkowej białek metodą elektroforezy w żelu poliakryloamidowym z SDS (wg Weber i Osborn, 1969) (G. Zaleśna) | 330 |
| 11.2.4. Oznaczanie punktu izoelektrycznego białek metodą ogniskowania izoelektrycznego (G. Zaleśna) | 332 |
| Literatura | 334 |
| 12. Chromatografia | 335 |
| 12.1. Podstawy teoretyczne, zastosowanie metody (K. Gwoździński) | 335 |
| 12.1.1. Chromatografia adsorpcyjna (K. Gwoździński) | 336 |
| 12.1.1.1. Izotermy adsorpcji | 338 |
| 12.1.1.2. Czynniki wpływające na rozdział chromatograficzny | 340 |
| 12.1.1.3. Monitorowanie rozdziału w chromatografii kolumnowej | 342 |
| 12.1.2. Chromatografia podziałowa (K. Gwoździński) | 344 |
| 12.1.3. Chromatografia bibułowa (K. Gwoździński) | 344 |
| 12.1.3.1. Identyfikacja chromatogramów | 345 |
| 12.1.3.2. Zależność między współczynnikiem Rf a budową substancji | 346 |
| 12.1.4. Chromatografia cienkowarstwowa (K. Gwoździński) | 347 |
| 12.1.5. Filtracja żelowa (K. Gwoździński) | 348 |
| 12.1.5.1. Złoża stosowane w chromatografii żelowej | 349 |
| 12.1.5.2. Współczynniki podziału w chromatografii żelowej | 350 |
| 12.1.5.3. Charakterystyka pasm i parametry kolumny chromatograficznej | 351 |
| 12.1.5.4. Oznaczanie mas cząsteczkowych metodą chromatografii żelowej | 354 |
| 12.1.6. Chromatografia jonowymienna (K. Gwoździński) | 355 |
| 12.1.6.1. Rodzaje wymieniaczy jonowych | 355 |
| 12.1.6.2. Parametry charakteryzujące wymieniacze jonowe | 356 |
| 12.1.6.3. Bufory stosowane w chromatografii jonowymiennej | 357 |
| 12.1.6.4. Zastosowania chromatografii jonowymiennej | 359 |
| 12.1.7. Wysokosprawna chromatografia cieczowa (K. Gwoździński) | 359 |
| 12.1.8. Chromatografia gazowa | 363 |
| 12.2. Ćwiczenia | 367 |
| 12.2.1. Zastosowanie metody filtracji żelowej do oznaczania masy cząsteczkowej białka (K. Gwoździński) | 367 |
| 12.2.2. Oznaczanie stężenia adduktu MDA-TBA metodą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej HPLC (K. Gwoździński) | 370 |
| 12.2.3. Rozdział barwników roślinnych za pomocą kolumnowej chromatografii adsorpcyjnej (K. Gwoździński) | 371 |
| 12.2.4. Rozdział substancji z wykorzystaniem chromatografii cienkowarstwowej (K. Gwoździński) | 372 |
| Literatura | 373 |
| 13. Biofizyka białek | 374 |
| 13.1. Ogólne informacje o białkach (Z. Szweda-Lewandowska) | 374 |
| 13.2. Właściwości funkcjonalne i fizykochemiczne hemoglobiny | 375 |
| 13.3. Ćwiczenia | 378 |
| 13.3.1. Otrzymywanie i oznaczanie stężenia hemoglobiny (Z. Szweda-Lewandowska) | 378 |
| 13.3.2. Oznaczanie krzywej dysocjacji tlenowej hemoglobiny metodą spektrofotometryczną (Z. Szweda-Lewandowska) | 379 |
| 13.3.3. Efekt Bohra (Z. Szweda-Lewandowska) | 381 |
| 13.3.4. Oznaczenie granicznej liczby lepkościowej [ ? ] roztworów hemoglobiny natywnej i zdenaturowanej (Z. Szweda-Lewandowska) | 382 |
| 13.3.5. Badanie stabilności methemoglobiny (Z. Szweda-Lewandowska) | 385 |
| 13.3.5.1. Otrzymywanie methemoglobiny (Z. Szweda-Lewandowska) | 385 |
| 13.3.5.2. Oznaczanie stabilności MetHb w środowisku kwaśnym oraz w obecności mocznika i chlorowodorku guanidyny (Z. Szweda-Lewandowska) | 386 |
| 13.3.5.3. Oznaczenie szybkości denaturacji MetHb w moczniku i chlorowodorkuguanidyny (Z. Szweda-Lewandowska) | 386 |
| 13.3.5.4. Wyznaczanie energii aktywacji dla procesu denaturacji MetHb w środowisku kwaśnym (Z. Szweda-Lewandowska) | 387 |
| 13.3.5.5. Wyznaczanie pK methemoglobiny (D. Pałecz) | 388 |
| 13.4. Charakterystyka dysmutazy ponadtlenkowej (G. Zaleśna) | 391 |
| 13.4.1. Izolowanie dysmutazy ponadtlenkowej z wątroby wieprzowej | 391 |
| 13.4.2. Charakterystyka białka enzymatycznego | 392 |
| 13.4.2.1. Oznaczanie białka | 393 |
| 13.4.2.2. Metoda barwienia żeli na aktywność dysmutazy ponadtlenkowej | 393 |
| 13.4.2.3. Metoda pirogallolowa oznaczania aktywności dysmutazy ponadtlenkowej | 394 |
| Literatura | 394 |
| 14. Biofizyka błon | 395 |
| 14.1. Błony biologiczne (M. Bryszewska) | 395 |
| 14.1.1. Skład lipidowy błon | 396 |
| 14.1.2. Asymetria lipidów błonowych | 398 |
| 14.1.3. Oddziaływania międzycząsteczkowe | 398 |
| 14.1.4. Płynność błony | 399 |
| 14.1.5. Ruchy cząsteczkowe w dwuwarstwie lipidowej | 400 |
| 14.1.6. Białka błonowe | 402 |
| 14.1.7. Transport przez błony | 404 |
| 14.2. Ćwiczenia | 405 |
| 14.2.1. Wyznaczanie współczynnika przenikania (D. Pałecz) | 405 |
| 14.2.2. Oporność osmotyczna erytrocytów (D. Pałecz) | 407 |
| 14.2.3. Energia aktywacji procesu hemolizy (D. Pałecz) | 411 |
| 14.2.3.1. Turbidymetryczny pomiar energii aktywacji procesu hemolizy | 412 |
| 14.2.3.2. Absorpcjometryczny pomiar energii aktywacji procesu hemolizy | 412 |
| 14.2.4. Izolowanie błon erytrocytarnych i charakterystyka chemiczna otrzymanego preparatu (A. Marczak) | 413 |
| 14.2.4.1. Izolowanie błon erytrocytarnych | 413 |
| 14.2.4.2. Ekstrakcja lipidów z błon erytrocytarnych (Vaskovsky i wsp., 1975) | 414 |
| 14.2.4.3. Charakterystyka chemiczna otrzymanych błon erytrocytarnych | 415 |
| 14.2.4.3.1. Oznaczanie zawartości białka | 416 |
| 14.2.4.3.2. Oznaczenie zawartości hemoglobiny | 416 |
| 14.2.4.3.3. Identyfikacja i oznaczanie ilościowe fosfolipidów błon erytrocytarnych | 416 |
| 14.2.4.3.4. Oznaczanie zawartości cholesterolu | 417 |
| 14.2.4.4. Opracowanie wyników | 417 |
| 14.2.5. Otrzymywanie liposomów z lecytyny jaja kurzego i badanie ich przepuszczalności dla chromianu (D. Pałecz) | 417 |
| 14.2.6. Wyznaczanie szybkości transportu 2,4-dinitrofenyloglutationu z erytrocytów człowieka (M. Soszyński) | 419 |
| Literatura | 442 |
| 15. Wolne rodniki, antyutleniacze oraz uszkodzenia lipidów, białek i kwasów nukleinowych | 423 |
| 15.1. Powstawanie wolnych rodników (M. Gwoździński) | 423 |
| 15.2. Reakcje wolnych rodników (M. Gwoździński) | 426 |
| 15.3. Wolne rodniki w biologii i medycynie (M. Gwoździński) | 428 |
| 15.3.1. Powstawanie wolnych rodników in vivo | 428 |
| 15.3.2. Udział czynników zewnętrznych w generowaniu aktywnych form tlenu | 432 |
| 15.4. Komórkowe i tkankowe systemy ochronne przeciw aktywnym formom tlenu (M. Gwoździński) | 437 |
| 15.5. Wolne rodniki w patologii (M. Gwoździński) | 444 |
| 15.5.1. Utlenianie i modyfikacja lipidów | 444 |
| 15.5.2. Utlenianie i modyfikacja białek | 447 |
| 15.5.3. Utlenianie kwasów nukleinowych | 451 |
| 15.6. Ćwiczenia | 452 |
| 15.6.1. Oznaczanie stężenia zredukowanego glutationu w erytrocytach poddanych działaniu H2O2 (A. Marczak, K. Rękawiecka) | 452 |
| 15.6.2. Oznaczanie rodników hydroksylowych HO* w układach biologicznych (Z. Szweda-Lewandowska) | 454 |
| 15.6.2.1. Analiza degradacji deoksyrybozy przez układy generujące rodniki HO* | 454 |
| 15.6.2.2. Oznaczanie stałych szybkości reakcji rodników HO? | 456 |
| 15.6.3. Oznaczanie całkowitej zdolności antyoksydacyjnej płynów biogennych (G. Batrosz) | 457 |
| 15.6.3.1. Oznaczanie całkowitej zdolności antyoksydacyjnej na zasadzie hamowania utleniania ABTS | 458 |
| 15.6.3.2. Oznaczanie całkowitej zdolności antyoksydacyjnej na zasadzie hamowania utleniania 2',7'-dichlorofluorescyny | 460 |
| 15.6.3.3. Oznaczanie całkowitej zdolności antyoksydacyjnej na zasadzie redukcji jonów żelazowych | 460 |
| 15.6.3.4. Oznaczanie całkowitej zdolności antyoksydacyjnej na zasadzie redukcji kationorodnika ABTS*+ | 461 |
| 15.6.4. Pułapkowanie spinowe (K. Gwoździński) | 463 |
| 15.6.4.1. Pułapkowanie rodnika HO* przy użyciu DMPO | 463 |
| 15.6.4.2. Pułapkowanie rodnika O2-* przy użyciu DMPO | 464 |
| 15.6.4.3. Pułapkowanie rodników O2-* i HO* w pobudzonych neutrofilach | 465 |
| 15.6.4.4. Pułapkowanie rodnika HO* przy użyciu PBN | 466 |
| Literatura | 467 |
| 16. Metody stosowane w badaniach apoptozy w komórkach (Z. Jóźwiak) | 468 |
| 16.1. Apoptoza - wprowadzenie | 468 |
| 16.1.1. Rola białka p53 | 469 |
| 16.1.2. Rodzina białek Bcl-2 | 469 |
| 16.1.3. Struktura i funkcja kaspaz | 471 |
| 16.1.4. Mechanizmy indukcji apoptozy | 472 |
| 16.2. Ćwiczenia | 474 |
| 16.2.1. Oznaczanie zmian apoptotycznych w komórkach za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego | 474 |
| 16.2.2. Oznaczanie potencjału błony mitochondrialnej | 476 |
| 16.2.3. Oznaczanie reaktywnych form tlenu w hodowlach komórkowych | 479 |
| 16.2.4. Oznaczanie wewnątrzkomórkowego stężenia wapnia w fibroblastach | 483 |
| 16.2.5. Oznaczanie aktywności kaspazy 3 w komórkach apoptotycznych | 484 |
| 16.2.6. Oznaczanie uszkodzeń DNA metodą kometową | 487 |
| 16.2.7. Oznaczanie fragmentacji DNA w żelu agarozowym | 489 |
| Literatura | 492 |
| 17. Cytometria przepływowa (J. Skierski) | 494 |
| 17.1. Wprowadzenie | 494 |
| 17.2. Ćwiczenia | 501 |
| 17.2.1. Utrwalanie komórek w alkoholu etylowym | 501 |
| 17.2.2. Oznaczanie zawartości kwasów nukleinowych DNA i RNA przy użyciu barwienia oranżem akrydyny | 502 |
| 17.2.3. Oznaczanie indeksu mitotycznego przy użyciu metody kwaśnej denaturacji DNA i barwienia oranżem akrydyny | 506 |
| 17.2.4. Oznaczanie odsetka komórek żywych i martwych przy użyciu dioctanu fluoresceiny i jodku propidyny | 509 |
| 17.2.5. Oznaczanie odsetka komórek apoptotycznych przy użyciu barwienia aneksyną V i jodkiem propidyny | 512 |
| 17.2.6. Oznaczanie zawartości DNA i białek cytoplazmatycznych w komórkach po zabarwieniu DAPI i sulforodaminą | 515 |
| 17.2.7. Wyznaczanie odsetka subpopulacji limfocytów przy użyciu zestawu przeciwciał monoklonalnych simultest firmy Becton-Dickinson | 520 |
| Literatura | 525 |
| 18. Zastosowanie laserów w biologii i medycynie | 526 |
| 18.1. Generowanie promieniowania laserowego (J. Kujawa) | 526 |
| 18.2. Oddziaływanie promieniowania laserowego z tkanką biologiczną (J. Kujawa) | 530 |
| 18.3. Ćwiczenia | 533 |
| 18.3.1. Określanie stopnia hemolizy krwinek czerwonych poddawanych naświetlaniu promieniowaniem laserowym po inkubacji z ftalocyjaninami (E. Krajewska, D. Pałecz) | 533 |
| 18.3.2. Pomiar aktywności acetylocholinoesterazy erytrocytarnej poddanej działaniu promieniowania laserowego (M. Sadowska) | 535 |
| Literatura | 537 |
| Tablice | 539 |
| Indeks | 551 |
Wypożyczaj w abonamencie!
Już od 2,66 zł za ebooka
