INNE EBOOKI AUTORA
Koszyk
-24%
Molekularne techniki analizy RNA
Ćwiczenia
Praca zbiorowa
Wydawca:
Format:
pdf, ibuk
Prezentowane w publikacji techniki są obecnie stosowane w większości laboratoriów zajmujących się biologią molekularną, ale ciągle brak ich opisu w literaturze polskojęzycznej. Wykłady do fakultetu „Molekularne techniki analizy RNA” obejmują aktualny stan wiedzy na temat metabolizmu RNA u eukariontów oraz teorię technik pozwalających na badanie poziomu RNA w komórce, nowo syntetyzowanego transkryptu oraz badania oddziaływań białek uczestniczących w transkrypcji.
Na ćwiczeniach praktycznych studenci poznają wybrane techniki badania RNA na przykładzie organizmów modelowych: drożdży Saccharomyces cerevisiae oraz rzodkiewnika Arabidopsis thaliana.
Prezentacja metod jest ilustrowana odpowiednimi przykładami, w których studenci samodzielnie badają poszczególne rodzaje RNA, jak utajnione, niestabilne transkrypty CUT czy microRNA, i etapy ich metabolizmu. Skrypt ten zawiera zarówno wprowadzenie teoretyczne odwołujące się do najnowszych pozycji literaturowych, jak i opis wykonania poszczególnych eksperymentów.
Skrypt adresowany do osób zainteresowanych metabolizmem RNA oraz nowoczesnymi, molekularnymi technikami jego badania – studentów wszystkich kierunków Wydziału Biologii i Międzywydziałowych Indywidualnych Studiów Matematyczno-Przyrodniczych Uniwersytetu Warszawskiego.
| Rok wydania | 2013 |
|---|---|
| Liczba stron | 64 |
| Kategoria | Biologia molekularna |
| Wydawca | Uniwersytet Warszawski |
| ISBN-13 | 978-83-235-1755-9 |
| Numer wydania | 1 |
| Język publikacji | polski |
| Informacja o sprzedawcy | ePWN sp. z o.o. |
POLECAMY
Ciekawe propozycje
Spis treści
| Wstęp | 7 |
| 1. Analiza northern – detekcja RNA na filtrach. Wykrywanie prekursorów rRNA u drożdży | 9 |
| Opis i cel doświadczenia | 9 |
| ĆWICZENIE 1. Izolacja całkowitego RNA z różnych organizmów oraz ocena jakościowa uzyskanego preparatu | 10 |
| Metody izolacji RNA | 10 |
| RNazy | 10 |
| Dobra praktyka laboratoryjna | 11 |
| Inhibitory RNaz | 11 |
| Przechowywanie RNA | 12 |
| Ocena jakości RNA | 12 |
| Izolacja całkowitego RNA z komórek drożdżowych | 13 |
| Literatura | 14 |
| ĆWICZENIE 2. Elektroforetyczny rozdział RNA w żelu agarozowym i ocena jakości RNA | 15 |
| Technika northern | 15 |
| Znakowanie izotopowe | 15 |
| Znakowanie nieizotopowe | 15 |
| Detekcja znaczników nieradioaktywnych | 16 |
| Elektroforeza RNA z drożdży w żelu agarozowym w warunkach denaturujących | 16 |
| Transfer kapilarny | 17 |
| ĆWICZENIE 3. Wykrywanie prekursorów rRNA u drożdży – hybrydyzacja | 18 |
| Skład buforów | 18 |
| Procedura hybrydyzacji | 18 |
| Odpłukanie nadmiaru sond | 18 |
| Wizualizacja hybrydyzacji | 18 |
| Literatura | 18 |
| 2. Analiza northern – wykrywanie transkryptów CUT u drożdży | 20 |
| Wstęp | 20 |
| Co to są CUTy? | 20 |
| Funkcje CUTów | 21 |
| Literatura | 21 |
| ĆWICZENIE 4. Elektroforeza RNA w denaturującym żelu poliakrylamidowym | 23 |
| Elektroforeza RNA w 6% żelu poliakrylamidowym z 7 M mocznikiem | 23 |
| Transfer elektryczny mokry | 23 |
| ĆWICZENIE 5. Hybrydyzacja RNA na membranie z sondą radioaktywną specyficzną wobec IGS1-R, wyznakowaną metodą „random-priming” | 24 |
| 3. Wykrywanie małych RNA | 25 |
| Wstęp | 25 |
| Małe interferujące RNA: miRNA i siRNA | 25 |
| Wybrane metody detekcji małych RNA (iRNA) | 26 |
| Literatura | 28 |
| ĆWICZENIE 4. Pulsacyjny RT-PCR, cz. 1 – pulsacyjna odwrotna transkrypcja | 29 |
| Materiały | 29 |
| Trawienie DNazą | 29 |
| Pulsacyjna odwrotna transkrypcja | 29 |
| ĆWICZENIE 5. Reakcja PCR – cz. 2 | 31 |
| ĆWICZENIE 6. Rozdział w żelu agarozowym produktów pulsacyjnego RT-PCR | 32 |
| Przygotowanie próbek | 32 |
| 4. Badanie końców cząsteczek RNA na przykładzie drożdżowych prekursorów snoRNA. Technika cRT-PCR | 33 |
| Wstęp | 33 |
| RNaza H | 33 |
| Ligacja RNA | 34 |
| Literatura | 34 |
| ĆWICZENIE 6. Trawienie RNazą H i ligacja RNA | 35 |
| Trawienie RNazą H | 35 |
| Ligacja RNA | 36 |
| ĆWICZENIE 7. Reakcja odwrotnej transkrypcji i PCR | 37 |
| Reakcja odwrotnej transkrypcji | 37 |
| PCR | 37 |
| ĆWICZENIE 8. Elektroforeza produktów PCR | 38 |
| 5. PCR ilościowy: RT-qPCR | 39 |
| Wstęp | 39 |
| Formaty detekcji produktów qPCR | 39 |
| Kontrola jakości RNA | 40 |
| Analiza doświadczeń qPCR | 40 |
| Najbardziej kluczowe elementy RT-qPCR | 41 |
| Literatura | 42 |
| ĆWICZENIE 8. Projektowanie starterów do qPCR – konkurs na najlepszą parę starterów | 43 |
| Wskazówki do projektowania starterów | 43 |
| Wykonanie ćwiczenia | 44 |
| ĆWICZENIE 9. Testowanie zaprojektowanych starterów do qPCR | 45 |
| Przygotowanie starterów | 45 |
| Przygotowanie reakcji qPCR | 45 |
| ĆWICZENIE 10. Analiza reakcji qPCR | 46 |
| 6. Oznaczenia aktywności enzymów biorących udział w obróbce RNA | 47 |
| Oznaczanie aktywności enzymów hydrolizy kapu | 47 |
| Struktura kapu transkryptów polimerazy RNA II | 47 |
| Hydroliza kapu | 48 |
| Badanie enzymatycznej hydrolizy kapu | 49 |
| Oznaczanie aktywności endonukleazy Rnt1 | 50 |
| Endonukleazy z rodziny RNazy III | 50 |
| Rnt1 | 51 |
| Biogeneza sn/snoRNA u drożdży Saccharomyces cerevisiae, rola Rnt1 | 52 |
| Literatura | 53 |
| ĆWICZENIE 11. Analiza aktywności Rnt1 w ekstrakcie drożdżowym | 55 |
| Protokół | 55 |
| 7. Analiza oddziaływania białka z kwasem nukleinowym: test opóźnienia migracji w żelu (EMSA) | 58 |
| Wstęp | 58 |
| Analiza EMSA | 58 |
| Terminacja transkrypcji polimerazy RNA I | 59 |
| Literatura | 60 |
| ĆWICZENIE 12. Wiązanie Reb1 do IGS1 rDNA in vitro | 61 |
| Badane warianty IGS1 rDNA S. cerevisiae | 61 |
| Wiązanie białka do DNA | 61 |
| Rozdział w natywnym żelu poliakrylamidowym | 61 |
| 8. Sztuczne microRNA – amiRNA | 63 |
| Wstęp | 63 |
| Wybrane zalety amiRNA | 64 |
| Wady amiRNA | 64 |
| Literatura | 64 |
| ĆWICZENIE 13. Projektowanie amiRNA | 64 |
KUP NA PREZENT
Molekularne techniki analizy RNA
12,69 zł
Uzupełnij informacje na temat odbiorcy.
Produkt został pomyślnie dodany do koszyka.
Nieudana próba zakupu produktu. Spróbuj jeszcze raz.